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[1]本品系用特定的誘生劑誘導(dǎo)健康人白細(xì)胞,經(jīng)提取后制成的凍干干擾素注射劑。用于某些病毒性疾病和腫瘤的輔助治療,對(duì)免疫缺陷性疾病也有一定療效。
1.1制造要求
1.1.1白細(xì)胞
獻(xiàn)血員供血應(yīng)符合獻(xiàn)血員體檢及化驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。一次供血不超過400ml,供全血間隔在3個(gè)月以上。
白細(xì)胞的分離,應(yīng)在采血后48小時(shí)內(nèi)進(jìn)行。活細(xì)胞數(shù)應(yīng)達(dá)到90%以上。
1.1.2誘生病毒
采用新城疫病毒(NDV)F株或仙臺(tái)病毒,經(jīng)檢定血凝效價(jià)達(dá)到適宜滴度,方可投產(chǎn)。
1.1.3培養(yǎng)液
采用RPMI-1640,內(nèi)含適量人血清和慶大霉素或卡那霉素。不得使用β椖邗0防囁股亍R部捎悶淥室伺嘌骸?/P>
1.1.4制造工作室的設(shè)置,應(yīng)符合工藝流程要求。冷庫及各種生產(chǎn)用具,必須,嚴(yán)禁與其他異種蛋白質(zhì)混用。制造工作室建筑應(yīng)便于清潔、消毒、防霉。在制造過程中,應(yīng)采取各種有效措施,防止細(xì)菌及熱原質(zhì)污染。直接接觸制品的用具,用后應(yīng)立即洗凈,用前應(yīng)除熱原質(zhì)及滅菌處理。
1.1.5生產(chǎn)用水應(yīng)符合飲用水標(biāo)準(zhǔn),直接用于制品的水應(yīng)符合注射用水標(biāo)準(zhǔn)。所用各種化學(xué)藥品應(yīng)符合《中國(guó)生物制品主要原材料試行標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定,未納入試行標(biāo)準(zhǔn)者應(yīng)不低于分析純。
1.2制造工藝
1.2.1誘生病毒
采用9~10日齡健康雞胚,于尿囊腔接種適量病毒,37℃培養(yǎng)48~72小時(shí),雞胚發(fā)育良好,病毒達(dá)到適宜滴度后,收集尿囊液,并做無菌試驗(yàn),合格后合并,抽樣做滴度測(cè)定,放?/FONT>20℃待用。亦可用其他適宜方法制備誘生病毒。
1.2.2 白細(xì)胞懸液
用離心法分離血漿,吸取白細(xì)胞層,用氯化銨液裂解紅細(xì)胞,或用其他適宜方法分離白細(xì)胞。然后用培養(yǎng)液稀釋,以每ml含活細(xì)胞1.0×107為宜。
1.2.3 起動(dòng)與誘生
白細(xì)胞懸液中加入少許白細(xì)胞干擾素,于37℃水浴攪拌培育2小時(shí),加入適量誘生病毒,待干擾素效價(jià)達(dá)到zui高峰時(shí),收集上清,即為粗制干擾素,置?/FONT>20℃保存。
1.2.4 純化
在粗制干擾素(效價(jià)應(yīng)在1.0×104IU以上)中加入硫氰酸鉀鹽析,然后分別在酸性和堿性條件下用乙醇分級(jí)沉淀,去除雜蛋白,再用硫氰酸鉀提純一次。亦可采用經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)的其他適宜方法。
1.2.5 溶解、透析或超濾
檢查硫氰酸鉀為陰性,除菌過濾后進(jìn)行半成品檢定。合格后方可分裝、凍干。
1.2.6 半成品檢定
半成品應(yīng)做理化檢查和比活性測(cè)定,比活性應(yīng)≥1.0×106IU/mg蛋白。加入人血白蛋白作保護(hù)劑后,應(yīng)做無菌試驗(yàn)、安全試驗(yàn)和熱原質(zhì)試驗(yàn)。試驗(yàn)方法及判定標(biāo)準(zhǔn)同成品檢定。
1.2.7 凍干
按《人血白蛋白(低溫乙醇法)制造及檢定規(guī)程》1.2.5項(xiàng)規(guī)定進(jìn)行凍干,但制品溫度不得超過35℃。
2.1 外觀
本品應(yīng)為白色或淡黃色疏松體,加水溶解后,為無色或淡黃色澄清液體,不得有搖不散的顆粒。
2.2 化學(xué)檢定
按《生物制品化學(xué)檢定規(guī)程》進(jìn)行。
2.2.1 水分測(cè)定
水分含量應(yīng)≤3%(g/g)。
2.2.2 pH值
pH值應(yīng)為6.8~7.8。
2.2.3 硫氰酸鉀殘余量測(cè)定。
取2滴干擾素原液加2滴9%三氯化鐵溶液,不呈現(xiàn)微紅色為合格。
2.3 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。每批抽樣品不少于10支。
2.4 熱原質(zhì)試驗(yàn)
按《生物制品熱 原質(zhì)試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。每只家兔靜脈注射0.2ml(2×105IU)。判定標(biāo)準(zhǔn)按該規(guī)程4.1項(xiàng)要求進(jìn)行。
2.5 全試驗(yàn)
2.5.1 豚鼠試驗(yàn)
用體重300~400g豚鼠2只,每只腹側(cè)皮下注射干擾素1ml(1.0×106IU),觀察7天,動(dòng)特健存,每只體重增加者為合格。如不符合上述要求,用4只豚鼠復(fù)試一次,判定標(biāo)準(zhǔn)同前。
2.5.2 小白鼠試驗(yàn)
用體重18~20g小白鼠5只,每只腹腔注射干擾素0.5ml(5×105IU),半小時(shí)內(nèi)動(dòng)物不應(yīng)有明顯的異常反應(yīng),繼續(xù)觀察7天,動(dòng)物均健存,每只體重增加者判為合格。如不符合上述要求,用10只小白鼠復(fù)試一次,判定標(biāo)準(zhǔn)同前。
2.6 HBsAg檢測(cè)
每安瓿凍干制品(1ml裝)加0.1ml滅菌注射用水溶解,用敏感性為1ng/ml以下的試劑盒測(cè)定,應(yīng)為陰性。
2.7 效價(jià)測(cè)定
按附錄方法測(cè)定,應(yīng)為標(biāo)示量的80%~150%。
2.8 殘余牛血清蛋白含量測(cè)定
如采用組織培養(yǎng)法制備誘生病毒,則成品中殘余牛血清蛋白含量應(yīng)≤50ng/支。
1.0×106IU/支
應(yīng)保存于10℃以下。有效期自品效價(jià)檢定合格之日起為1.5年。
采用CPE(細(xì)胞致病效應(yīng))抑制為基礎(chǔ)的抑制微量測(cè)定法,以每ml干擾素檢品的zui高稀釋度仍能保護(hù)半數(shù)細(xì)胞(50)免受病毒攻擊的稀釋度的倒數(shù)定為干擾素單位。以單位(IU)表示,并用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品校正結(jié)果。
3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
將新鮮傳代24~48小時(shí)的Wish細(xì)胞(人羊膜細(xì)胞)以約35萬/ml的濃度另入96孔組織培養(yǎng)板上,每孔100μl,置37℃5%CO2孵箱中培養(yǎng)4~6小時(shí)。
干擾素檢品做4倍系列稀釋,每份檢品做6個(gè)稀釋度(如100萬單位,則測(cè)4-12~4-7)每個(gè)稀釋度加2孔,與培養(yǎng)板中的細(xì)胞等量混合,置37℃5%CO25%CO2孵箱培養(yǎng)18~24小時(shí)。
倒掉培養(yǎng)板中的上清液,以100CCID50/ml的濃度加入VSV(水泡性口腔炎病毒),每孔100μl,37℃5%CO2孵箱培養(yǎng)24小時(shí)左右。
顯微鏡下觀察細(xì)胞病變,若病毒對(duì)照各孔細(xì)胞出現(xiàn)75%~1000%的明顯病變和死亡(變圓、死亡、脫落(,而細(xì)胞對(duì)照組中的細(xì)胞仍生長(zhǎng)良好(病變=0),則表明對(duì)照系統(tǒng)合格,結(jié)果成立。
通常可按Reed?/FONT>Muench法計(jì)算,其步驟如下:
(1)計(jì)算保護(hù)百分比
稀釋度 | 病變平均值(每孔) | 正常平均值(每孔) | 累積數(shù) | 比例 | 百分比(%) | |
病變 | 正常 | 正常/病變+正常 | ||||
4-1 | 0 | 4 | 0 | 13 | 13/13 | 100 |
4-2 | 0 | 3 | 0 | 9 | 9/9 | 100 |
4-3 | 1 | 2 | 1 | 5 | 5/6 | 83 |
4-4 | 2 | 2 | 3 | 2 | 2/5 | 40 |
4-5 | 4 | 0 | 7 | 0 | - | - |
4-6 | 4 | 0 | 11 | 0 | - | - |
(2)求出干擾素單位
距離比=(·高于50%的百分?jǐn)?shù)-50)/(高于50%的百分?jǐn)?shù)-低分50%百分?jǐn)?shù))=(83-50)/(83-40)=33/43=0.77
即此批干擾素稀釋到4-3。77(1∶186)時(shí)能保護(hù)半數(shù)細(xì)胞免受攻擊病毒損害。此批干擾素效價(jià)為186單位,經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品修正,得出干擾素的單位(以IU表示)。
本品系用特定誘生劑,誘導(dǎo)健康人白細(xì)胞,經(jīng)提取后制成的凍干干擾素注射劑,為白色或淡黃色疏松體,加水溶解后為無色或淡黃色澄清液體。用于某些病毒性疾病和腫瘤的輔助治療,對(duì)某些免疫缺陷性疾病也有一定療效。
主要用于治療慢性乙型肝炎、丙型肝炎、流行性出血熱、尖銳濕疣、毛細(xì)胞白血病、小兒嬰幼兒病毒性肺炎、子宮頸炎、皰疹性角膜炎、帶狀皰疹、流行性腮腺炎等疾病。如與化療、放療配合治療腫瘤,可改善患者血象和全身癥狀。
本品用1~2ml滅菌注射用水溶解。可肌內(nèi)注射或病變局部使用。肌內(nèi)注射,每日1~2次,每次一支,連續(xù)5~10天為一療程,每療程間隔2~3天,或遵醫(yī)囑。
1.對(duì)雞蛋過敏者忌用。
2.注射本品后,一般無反應(yīng),個(gè)別患者注射后有低熱反應(yīng)或不同程度不適,停藥后即可消失。
3.如安瓿有裂紋或溶解后有搖不散的顆粒,不可使用。
應(yīng)保存于10℃以下暗處。
聯(lián)系方式
郵件:sale@boyikang.com